Kligler Hierro Agar

uso
Medio de cultivo frecuentemente usado en microbiología de ali- mentos para la diferenciación de enterobacterias, en base a la fermentación de hidratos de carbono y a la producción de ácido sulfhídrico.
Fundamento
En el medio de cultivo, la peptona de carne y la tripteína, aportan los nutrientes adecuados para el desarrollo bacteriano. La lactosa y la glucosa son los hidratos de carbono fermentables. El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la producción de ácido sul- fhídrico, el citrato de hierro y amonio, es la fuente de iones Fe3+, los cuales se combinan con el ácido sulfhídrico y producen sulfuro de hierro, de color negro. El rojo de fenol es el indicador de pH, y el cloruro de sodio mantiene el balance osmótico. El agar es el agente solidificante.
Por fermentación de azúcares se producen ácidos que se detectan por medio del indicador rojo de fenol, el cual vira al color amarillo en medio ácido. El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidróge- no el que reacciona luego con una sal de hierro proporcionando el típico sulfuro de hierro de color negro.
contenIdo y composIcIón
Código B0223405: envase x 100 g. Código B0223406: envase x 500 g.
Fórmula (en gramos por litro)
PEPtOnA DE CArnE.....................................................................................................13.0 CLOrurO DE SODiO.........................................................................................................5.0 LACtOSA .....................................................................................................................................10.0 triPtEínA..................................................................................................................................10.0 GLuCOSA ...................................................................................................................................... 1.0 CitrAtO DE HiErrO y AMOniO........................................................................... 0.5 tiOSuLFAtO DE SODiO...................................................................................................0.3 rOjO DE FEnOL.............................................................................................................0.025 AGAr ...............................................................................................................................................15.0 pH FinAL: 7.3 ± 0.2

Instrucciones

Suspender 54.8 g del polvo en 1 litro de agua purificada. Dejar reposar 5 minutos. Calentar con agitación frecuente, hervir 1 o 2 minutos hasta disolución total.
Distribuir en tubos, en volumen que ocupe hasta la tercera parte de los mismos. Esterilizar en autoclave a 121°C por 15 minutos. Enfriar y dejar solidificar en posición inclinada (pico de flauta pro- fundo).
característIcas del producto
Medio de cultivo deshidratado: color beige amarillento, homogéneo, libre deslizamiento.
Medio de cultivo preparado: color rojo.
Almacenamiento
Medio de cultivo deshidratado a 10-35 oC. Medio de cultivo preparado a 2-8 oC.
Procedimiento
siembra
A partir de un cultivo puro del microorganismo en estudio, con aguja de inoculación inocular el medio de cultivo, picando el fondo y ex- tendiendo sobre la superficie del mismo.
Incubación
En aerobiosis, a 35-37°C durante 18 a 24 horas.
Interpretación de los resultados
Observar el color del medio de cultivo y la producción de gas.
1- superficie alcalina/profundidad ácida (pico rojo/fondo amarillo): el microorganismo solamente fermenta la glucosa.
2- superficie ácida/profundidad ácida (pico amarillo/fondo amarillo): el microorganismo fermenta glucosa, y lactosa.
3- superficie alcalina/profundidad alcalina (pico rojo/fondo rojo): el microorganismo es no fermentador de azúcares.
4- la presencia de burbujas o la ruptura del medio de cultivo indican que el microorganismo produce gas.
5- el ennegrecimiento del medio indica que el microorganis- mo produce ácido sulfhídrico.