https://www.youtube.com/watch?v=-TnHCd4sY24
ORIGEN DE LA VIDA Y MICROBIOLOGIA
https://www.youtube.com/watch?v=hso40Im_vuQ
lunes, 8 de diciembre de 2014
Propiedades bioquímicas de las bacterias
Enzimas: Proteínas altamente especializadas encargadas de catalizar reacciones químicas.
Endoenzimas: enzimas intracelulares cuya función es catalizar reacciones, tanto de síntesis como de degradación.
Exoenzimas: enzimas extracelulares que son excretadas a través de la pared celular al medio ambiente para catalizar reacciones de degradación de macromoléculas. Ejemplo enzimas hidrolizantes, enzimas amiloliticas y ej. Hidrolisis del almidón.
Las enzimas microbianas se dividen en:
a) Hidrolizantes: amiloliticas, sacarariliticas o fermentativas, proteoliticas, lipoliticas.
b) Reductoras y oxidantes: Reductasas y oxidasas.
c) Coagulantes: Coagulasa o fermento lab.coagulasa sanguínea.
d) Citoliticas: Hemolisinas, leucocidinas.
ANOTACIONES
Agar staphylococcus 110
· Medio selectivo.
· Sirve para aislar staphylococcus: Aureus, epidermis.
· La presencia de los pigmentos (Cambio de coloración) indica si es – o +.
· La gelatina es el sultrato de enzima gelatinosa
UFC: unidad formadora de colonias-
Concentración:
149 g _____________ 1000ml
7.45 g_____________ 50 ml
Agar Citrato Simmons
Medio utilizado para la diferenciación de enterobacterias en base a la capacidad de usar citrato como única fuente de carbono y Energía.
Resultados:
- Positivo: color azul
- Negativo: color verde
Concentración:
24.2g_____________________1000ml
1.21g_____________________ 50 ml
Agar Hierro Kliger
· Utilizado para la diferenciación de enterobacterias en base a la fermentación de lactosa y glucosa, además de la formación de ácido sulfhídrico.
· Se solidifica en forma inclinada permitiendo tener dos cámaras de crecimiento una aeróbica, en el pico de flauta y la otra anaeróbica, en el fondo del tubo.
Características
· Medio diferencial, basado en la fermentación glucosa y lactosa, formación H2S, formación de gas, movilidad – ruptura del medio, en tubo inclinado, cambios de color Acido/Acido – no hay cambio.
· PH= 7.4 +/- 0.2.
· Indicador: Rojo fenol.
· Se desarrolla en un medio ligeramente alcalino.
· Genera una condición aerobia.
· La producción del H2S se debe a que se utiliza el biosulfato de sodio.
Método de preparación
· Suspender 52g en 1000 ml de agua hervir durante un minuto en un tubo inclinado.
52g __________________1000ml
2.6g___________________50ml
Siembra
Por picadura en el agar y estría en la superficie inclinada
Incubación
de 18 – 24 horas y de 35 – 37 ºC con condiciones aerobias.
Limitaciones
· Los resultados deben ser leídos luego de 18-24 hrs de incubación, después de este tiempo pueden ser falsos por el consumo de peptonas.
· Si la concentración de H2S es elevada lleva al ennegrecimiento.
· Usar agujas de inoculación.
Caldo de urea
Es un medio solido diferencial para microorganismos, en especial los miembros de la especie enterobacteria, según su capacidad de producir ureasa.
· Medio de cultivo sólido.
· Medio de cultivo diferencial.
· Solo se utiliza para bacterias Gram Negativo.
· Se utiliza para diferenciar (Proteus, salmonella y shigella).
La ureasa es una enzima que cataliza la hidrolisis de urea dióxido de carbono y amoniaco.
Prueba rapida:
Se realiza a partir de la muestra de la biopsia que se inocula en un medio para la determinación de urea, como por ejemplo, caldo urea o cris tensen. Evidencia, cuando es positiva que puede tratarse de Pylori.
Características
· Si los nutrientes suministrados por el extracto de levadura se consumen antes de que la bacteria muestre un crecimiento aceptable no podrá determinarse con exactitud.
· Cuando da negativo la bacteria no utiliza el amoniaco como fuente de nitrógeno.
· Sembrar el medio de cultivo con el cultivo puro de ensayo. Incubar 24 – 48 horas a 35 ºC. En ocasiones hasta 72 horas.
· No se recomienda para las bacterias con reacción de ureasa retardada.
· Indicador: Rojo fenol.
· PH: 6.8 +/- 0.2 = ligeramente alcalino.
Concentración
3.87 g _______________________ 1000ml
1.93 g________________________50 ml
Agar Mac Conkey
· Es un medio selectivo diferencial.
· Aísla y deferencia bacilos gram negativo.
· Fermentadores y no fermentadores de lactosa.
· La azúcar fermentable es la lactosa.
· El indicador: Rojo neutro.
· Tiene un pH final 7.1 +/- 0.2, ligeramente básico.
· Cuando es negativo no hay fermentación de lactosa.
EMB
· Es un medio selectivo diferencial para enterobacterias Gram negativas.
· Contiene lactosa y sacarosa.
· El indicador es la eosina y el azul de metileno.
· Afinidad por el fosfato dipotásico.
· Se prepara en placa.
· PH: 7.2 +/- 0.2, ligeramente básico.
· Las sepas que se identifican son verde brillante (son de E. coli y citrobacter).
TSI Agar
Medio universalmente empleado para la diferenciación de enterobacterias, en base a la fermentación de glucosa, lactosa, sacarosa y a la producción de ácido sulfhídrico.
Fundamento
En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, aportan los nutrientes adecuados para el desarrollo bacteriano. La lactosa, sacarosa y glucosa son los hidratos de carbono fermentables. El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la producción de ácido sulfhídrico, el sulfato de hierro y amonio, es la fuente de iones Fe3+ , los cuales se combinan con el ácido sulfhídrico y producen sulfuro de hierro, de color negro. El rojo de fenol es el indicador de pH, y el cloruro de sodio mantiene el balance osmótico.
Por fermentación de azúcares, se producen ácidos, que se detectan por medio del indicador rojo de fenol,el cual vira al color amarillo en medio ácido. El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidrógeno el que reacciona luego con una sal de hierro proporcionando el típico sulfuro de hierro de color negro.
Fundamento
En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, aportan los nutrientes adecuados para el desarrollo bacteriano. La lactosa, sacarosa y glucosa son los hidratos de carbono fermentables. El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la producción de ácido sulfhídrico, el sulfato de hierro y amonio, es la fuente de iones Fe3+ , los cuales se combinan con el ácido sulfhídrico y producen sulfuro de hierro, de color negro. El rojo de fenol es el indicador de pH, y el cloruro de sodio mantiene el balance osmótico.
Por fermentación de azúcares, se producen ácidos, que se detectan por medio del indicador rojo de fenol,el cual vira al color amarillo en medio ácido. El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidrógeno el que reacciona luego con una sal de hierro proporcionando el típico sulfuro de hierro de color negro.
Fórmula (en gramos por litro)
| Instrucciones | |
Extracto de carne
|
3.0
|
Suspender 62,5 g del polvo por litro de agua destilada. Mezclar bien y calentar con agitación frecuente, hervir 1 o 2 minutos hasta disolución total. Llenar hasta la tercera parte de los tubos de ensayo. Esterilizar a 121°C por 15 minutos. Enfriar en pico de flauta profundo.
|
Pluripeptona
|
20.0
| |
Cloruro de sodio
|
5.0
| |
Lactosa
|
10.0
| |
Sacarosa
|
10.0
| |
Glucosa
|
1.0
| |
Sulfato de hierro y amonio
|
0.2
| |
Tiosulfato de sodio
|
0.2
| |
Rojo de fenol
|
0.025
| |
Agar
|
13.0
| |
pH final: 7.3 ± 0.2
| ||
Siembra
A partir de un cultivo puro, sembrar en TSI, picando el fondo y extendiendo sobre la superficie del medio.
Incubación
A 35-37°C durante 24 horas, en aerobiosis.
Resultados
A partir de un cultivo puro, sembrar en TSI, picando el fondo y extendiendo sobre la superficie del medio.
Incubación
A 35-37°C durante 24 horas, en aerobiosis.
Resultados
1-Pico alcalino/fondo ácido (pico rojo/fondo amarillo): el microorganismo solamente fermenta la glucosa.
2-Pico ácido/fondo ácido (pico amarillo/fondo amarillo): el microorganismo fermenta glucosa, lactosa y/o sacarosa.
3-Pico alcalino/fondo alcalino (pico rojo/fondo rojo): el microorganismo es no fermentador de azúcares.
4-La presencia de burbujas, o ruptura del medio de cultivo, indica que el microorganismo produce gas.
5-El ennegrecimiento del medio indica que el microorganismo produce ácido sulfhídrico.
2-Pico ácido/fondo ácido (pico amarillo/fondo amarillo): el microorganismo fermenta glucosa, lactosa y/o sacarosa.
3-Pico alcalino/fondo alcalino (pico rojo/fondo rojo): el microorganismo es no fermentador de azúcares.
4-La presencia de burbujas, o ruptura del medio de cultivo, indica que el microorganismo produce gas.
5-El ennegrecimiento del medio indica que el microorganismo produce ácido sulfhídrico.
Microorganismo
|
Pico/Fondo
|
Producción de gas
|
Producción deácido sulfhídrico
|
E. coli ATCC 25922
|
A/A
|
+
|
-
|
K. pneumoniae ATCC 700603
|
A/A
|
+
|
-
|
P. mirabilis ATCC 43071
|
K/A
|
+
|
+
|
S. typhimurium ATCC 14028
|
K/A
|
-
|
+
|
S. enteritidis ATCC 13076
|
K/A
|
+
|
+
|
S. flexneri ATCC 12022
|
K/A
|
-
|
-
|
P. aeruginosa ATCC 27853
|
K/K
|
-
|
-
|
A: ácido
K: alcalino
Características del medio
Medio preparado: rojo
Almacenamiento
Medio deshidratado: a 10-35 ºC.
Medio preparado: a 2-8 ºC.
K: alcalino
Características del medio
Medio preparado: rojo
Almacenamiento
Medio deshidratado: a 10-35 ºC.
Medio preparado: a 2-8 ºC.
Presentación
| |
x 100g :Código: B02-134-05
|
x 500g :Código: B02-134-06
|
E.M.B. AGAR.
Este medio (también denominado E.A.M.) es utilizado para el aislamiento selectivo de bacilos Gram negativos de rápido desarrollo y escasas exigencias nutricionales. Permite el desarrollo de todas las especies de la familia Enterobacteriaceae.
Fundamento
Este medio combina las fórmulas de Holt-Harris y Teague con la de Levine, para obtener un mejor rendimiento en el aislamiento selectivo de enterobacterias y otras especies de bacilos Gram negativos. La diferenciación entre organismos capaces de utilizar la lactosa y/o sacarosa, y aquellos que son incapaces de hacerlo, está dada por los indicadores eosina y azul de metileno; éstos ejercen un efecto inhibitorio sobre muchas bacterias Gram positivas. Muchas cepas de Escherichia coli y Citrobacter spp. presentan un característico brillo metálico. Las cepas que utilizan la lactosa poseen centro oscuro con periferia azulada o rosada, mientras que las que no lo hacen son incoloras. Este medio permite el crecimiento de Candida spp. como colonias rosadas y puntiformes; la siembra en profundidad permite el desarrollo de clamidosporas en C. albicans. Enterococcus spp. crece en este medio como colonias puntiformes y transparentes, mientras que Acinetobacter spp. y otras bacterias oxidativas pueden dar colonias de color azul lavanda; esto puede ocurrir aunque las cepas no sean capaces de acidificar a partir de lactosa al 0.5% y ello se debe a la incorporación de azul de metileno a sus membranas. En este medio se obtiene además, un buen desarrollo de especies de Salmonella y Shigella.
Fórmula (en gramos por litro)
|
Instrucciones
| |
Peptona
|
10.0
|
Suspender 36 g del polvo en un litro de agua destilada. Reposar 5 minutos; mezclar, calentando a ebullición durante 1 o 2 minutos hasta su disolución. Esterilizar en autoclave a no más de 121°C durante 15 minutos. Enfriar a 45°C y distribuir agitando suavemente.
|
Lactosa
|
5.0
| |
Sacarosa
|
5.0
| |
Fosfato dipotásico
|
2.0
| |
Agar
|
13.5
| |
Eosina
|
0.4
| |
Azul de metileno
|
0.065
| |
pH final: 7.2 ± 0.2
| ||
Siembra En superficie, por estriado a partir de un inóculo poco denso, para obtener colonias aisladas.
En profundidad, para favorecer el desarrollo de clamidosporas.
IncubaciónDe 24 a 48 horas a 35-37 °C, en aerobiosis.
Resultados
Microorganismos
|
Tipo de Colonia
|
Escherichia coli ATCC 25922
|
Verdosas con brillo metálico y centro negro azulado
|
Klebsiella pneumoniae ATCC 700603
|
Mucosas, rosa púrpura, confluentes
|
Proteus mirabilis ATCC 43071
|
Incoloras
|
Enterococcus faecalis ATCC 29212
|
Incoloras, pequeñas, puntiformes
|
Shigella flexneri ATCC 12022
|
Incoloras
|
Salmonella typhimurium ATCC 14028
|
Incoloras
|
Características del medio:
Placas preparadas: color púrpura.
La esterilización del medio de cultivo reduce el azul de metileno al color naranja. El color púrpura se restaura por agitación. La presencia de un precipitado en el medio esterilizado es normal y no debe ser removido, ya que es parte esencial del mismo.
Almacenamiento:Medio deshidratado: a 10-35 ºC.
Medio preparado: a 2-8 ºC.
Presentación
| ||
x 100g :Código: B02-101-05
|
x 500g :Código: B02-101-06
|
6 x 50 ml: B04-101-84
|
MAC CONKEY AGAR
Este medio se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram negativos de fácil desarrollo, aerobios y anaerobios facultativos. Permite diferenciar bacterias que utilizan o no, lactosa en muestras clínicas, de agua y alimentos. Todas las especies de la familia Enterobacteriaceae desarrollan en el mismo.
Fundamento
En el medio de cultivo, las peptonas, aportan los nutrientes necesarios para el desarrollo bacteriano, la lactosa es el hidrato de carbono fermentable, y la mezcla de sales biliares y el cristal violeta son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de gran parte de la flora Gram positiva.
Por fermentación de la lactosa, disminuye el pH alrededor de la colonia. Esto produce un viraje del color del indicador de pH (rojo neutro), la absorción en las colonias, y la precipitación de las sales biliares.
Los microorganismos no fermentadores de lactosa producen colonias incoloras.
Fórmula (en gramos por litro)
| INSTRUCCIONES | |
Peptona
|
17.0
|
Suspender 50 g del polvo por litro de agua destilada. Reposar 5 minutos y mezclar hasta uniformar. Calentar suavemente y hervir 1 a 2 minutos hasta disolver. Esterilizar en autoclave a 121°C durante 15 minutos.
|
Pluripeptona
|
3.0
| |
Lactosa
|
10.0
| |
Mezcla de sales biliares
|
1.5
| |
Cloruro de sodio
|
5.0
| |
Agar
|
13.5
| |
Rojo neutro
|
0.03
| |
Cristal violeta
|
0.001
| |
pH final: 7.1 ± 0.2
| ||
Siembra- Sembrar en superficie.
- Utilizando la técnica de Pour Plate: sembrar 1 ml de muestra y agregar aproximadamente 15 ml de medio de cultivo fundido y enfriado a 45-50 ºC.
IncubaciónDurante 18-48 horas, a 35-37 ºC, en atmósfera aeróbica
Resultados
Microorganismos
|
Colonias
|
Escherichia coli ATCC 25922
|
Rojas con halo turbio
|
Klebsiella pneumoniae ATCC 700603
|
Rosadas mucosas
|
Salmonella typhimurium ATCC 14028
|
Incoloras, transparentes
|
Shigella flexneri ATCC 12022
|
Incoloras, transparentes
|
Proteus mirabilis ATCC 43071
|
Incoloras, transparentes
|
Enterococcus faecalis ATCC 29212
|
Diminutas, incoloras, opacas
|
Características del medio
Medio preparado: rojo púrpura
Almacenamiento:Medio deshidratado: a 10-35 ºC.Medio preparado: a 2-8 ºC.
CHRISTENSEN MEDIO (UREA AGAR BASE).
Medio utilizado para diferenciar microorganismos en base a la actividad ureásica.
Se utiliza para identificar bacterias que hidrolizan urea, tales como Proteus spp., otras enterobacterias y estafilococos.
Fundamento
En el medio de cultivo, la tripteína y la glucosa, aportan los nutrientes para el desarrollo de microorganismos. El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico, y el rojo de fenol es el indicador de pH.
Algunas bacterias hidrolizan la urea por medio de la enzima ureasa liberando amoníaco y dióxido de carbono. Estos productos alcalinizan el medio haciendo virar el rojo de fenol del amarillo al rojo. En este medio, la fermentación de la glucosa activa la enzima ureasa, acelerando la velocidad del metabolismo en aquellos organismos que hidrolizan lentamente la urea, como especies de Enterobacter o Klebsiella.
Fórmula (en gramos por litro)
|
Instrucciones
| |
Tripteína
|
1.0
|
Suspender 24 g de polvo en 950 ml de agua destilada. Dejar reposar 2 minutos. Esterilizar en autoclave a 121°C durante 15 minutos. Enfriar a 50°C y agregar 50 ml de una solución de urea al 40% previamente esterilizada por filtración o cloroformo. Fraccionar en tubos de hemólisis y solidificar en pico de flauta con fondo profundo.
|
Glucosa
|
1.0
| |
Cloruro de sodio
|
5.0
| |
Fosfato monopotásico
|
2.0
| |
Rojo de fenol
|
0.012
| |
Agar
|
15.0
| |
pH final: 6.8 ± 0.2
| ||
Siembra
A partir de un cultivo puro de 18-24 horas, estriar la superficie del pico de flauta. Algunos microorganismos pueden requerir mayor tiempo de incubación.
Se recomienda no punzar la capa profunda para controlar el color.
Incubación
En aerobiosis, durante 24-48 horas a 35-37 °C.
Resultados
Microorganismo
|
Actividad ureásica
|
Color del medio
|
Proteus mirabilis ATCC 43071
|
Positiva
|
Rojo-Rosado
|
K. pneumoniae ATCC 700603
|
Positiva débil
|
Rojo-Rosado
|
Escherichia coli ATCC 25922
|
Negativa
|
Amarillo
|
S. flexneri ATCC 12022
|
Negativa
|
Amarillo
|
S. typhimurium ATCC 14028
|
Negativa
|
Amarillo
|
Limitaciones
-Bacterias que hidrolizan lentamente la urea, como ser Klebsiella, Enterobacter y Citrobacter, viran al color rojo-rosado de todo el medio de cultivo luego de varios días de incubación.
-No calentar o sobrecalentar el medio de cultivo porque la urea se descompone fácilmente.
Características del medio
Medio preparado: amarillo
Almacenamiento
Medio deshidratado: a 10-35 ºC.
Medio preparado: a 2-8 ºC.
Presentación
| |
x 100g :Código: B02-109-05
|
x 500g :Código: B02-109-06
|
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